Tools

всё о медицине

You are here: Главная » Полезные материалы » Микробы » Реакция гемолиза

Реакция гемолиза

Реакция гемолиза

Парентеральное введение животным эритроцитов другого вида животных сопровождается появлением в крови специфических защитных антител — гемолизинов, способных нарушать связь гемоглобина со стромой эритроцитов и обусловливать гемолиз, т. е. выхождение его в окружающую среду. Реакцией гемолиза в иммунобактериологической практике пользуются главным образом для определения титра гемолитических сывороток. Гемолитическая сыворотка представляет собой сыворотки кролика, иммунизированного эритроцитами барана. Гемолитическую сыворотку выпускают институты бактерийных препаратов. На этикетке каждой ампулы указан титр сыворотки и обозначен срок ее годности. Перед употреблением, особенно если ампулы хранились длительное время, проверяют титр гемолитической сыворотки (табл. 12). Титром гемолитической сыворотки называется максимальное разведение ее в объеме 0,5 мл, при котором наблюдается полный гемолиз 0,5 мл 3% взвеси бараньих эритроцитов в присутствии 0,5 мл комплемента, разведенного 1:10, после выдерживания пробирок в течение часа в термостате при 37°С. Реакция гемолиза протекает при обязательном участии трех компонентов: 1) гемолитической сыворотки, содержащей специфические антитела — гемолизины; 2) 3% взвеси эритроцитов барана (антиген, которым иммунизировались кролики); 3) неспецифического фактора — комплемента (см. с. 149).

Реакция гемолиза

Техника постановки реакции гемолиза при определении титра гемолитической сыворотки сводится к следующему. К 0,1 мл инактивированной сыворотки прибавляют 9,9 мл изотонического раствора хлорида натрия, получая таким образом основное разведение сыворотки 1 : 100. Из основного разведения, пользуясь схемой (табл. 13), готовят ряд разведений—от 1 :1000 до 1:4500. Из каждой пробирки приготовленного ряда разведений берут по 0,5 мл, переносят в свободные пробирки с надписями, соответствующими степени разведения внесенной в них сыворотки.

Для переноса сыворотки из одной пробирки в другую можно пользоваться одной пипеткой, начиная работу с наибольших разведений сыворотки. В приготовленный ряд разведений гемолитической сыворотки, разлитой в равных объемах по 0,5 мл, прибавляют равные количества (по 0,5 мл) 3% взвеси эритроцитов и 10% раствора комплемента, после чего общий объем жидкости в каждой пробирке доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 2,5 мл (табл. 14). При постановке реакции гемолиза и титрования гемолитической сыворотки ставят три обязательных контроля: 1. Контроль на инактивацию комплемента (Ki). 2. Контроль комплемента на отсутствие в нормальной сыворотке морских свинок специфических антител (Кг)- 3. Контроль на устойчивость эритроцитов при выдерживании их в термостате при 37 °С (Кз)- После того как смешают все перечисленные ингредиенты,. участвующие в реакции, штатив с пробирками энергично-встряхивают и ставят в термостат на 1 ч и затем учитывают результат реакции (рис. 18). Интенсивность гемолиза характеризуется различной степенью разрушения эритроцитов.


Newer news items:
Older news items: